50分急求 如何用光敏生物素标记质粒？

《50分急求 如何用光敏生物素标记质粒？》正文开始，本次阅读大概5分钟。

生物素化质粒ds-DNA：将含质粒pBR332的大肠杆菌在含氨苄青霉素的LB培养基中扩增，取纯培养物用MagicTM DNA纯化系统，按Promega公司所附操作说明书提取质粒ds-DNA。取纯化的不含单链DNA的大肠杆菌质粒ds-DNA直接与长臂光敏生物素混合，用光标记灯进行光照标记，以制备生物素化质粒ds-DNA。可参考以下步骤：在一灭菌EP管中加待标记DNA 5ug／10uL，在暗室中加入5ug／uL光敏生物素，充分混匀，置冰浴中。 在特制光源下10cm处照射20min。加入100mmol／LTris-HCl，pH9．0(含0．1mmol／LEDTA)10uL，混匀。再加入等体积仲丁醇，混匀。离心lmin(10 000r／rain)，吸去上层仲丁醇，弃去。再加入仲丁醇25uL，重复提取游离的光敏生物素。吸去上层无色仲丁醇后，加入5uL3mol／L醋酸钠，充分混匀，加入冷无水酒精100gL充分混匀，沉淀标记的DNA，置-20℃过夜(或-70℃l5min)，15 000r／min离心20min，沉淀物再用70％乙醇洗1次，离心，抽干，溶于0．1mmol／LEDTA或T